生物试剂篇一:生物试剂配方
生物试剂配方
一,健那绿:1,)1%健那绿:0.5g+50ml生理盐水
2)1/5000健那绿染液:取1%的健那绿1ml加入49ml生理盐水=20ml健那绿+980mll生理盐水
二,吡罗红甲基绿:A液:1)甲基绿2g+98ml水
2)吡罗红G5g+95ml水
3)取60ml甲基绿与20ml吡罗红加入到160ml水,放入棕色瓶备用。
B液:1)乙酸钠16.4g,加水至1000ml
2)乙酸12ml,加水至1000ml
3)乙酸钠溶液300ml+稀乙酸200ml+500ml水
吡罗红甲基绿试剂:A液200ml+B液800ml
三.牙签消毒:KMno4溶液,取0.1g~0.5g高猛酸钾溶于100蒸馏水中
四.生理盐水:0.9%:取9g盐溶于1000ml水中
五.30%蔗糖溶液:300g蔗糖加水至1000ml
六.1g龙胆紫溶于100ml水,稀释到500ml,存于棕色瓶中。
七.斐林试剂:甲液:100g氢氧化钠(NaOH)加水至1000ml
乙液:50gCuSO4加水至1000ml
苏丹:1g干粉加95%酒精至1000ml
双缩脲:A液:同甲液B液:10gCuSO4加水至1000ml
八.淀粉酶:2%:20g酶+980ml水
淀粉3%:30g淀粉+970ml水
蔗糖3%:30g糖+970ml水
过氧化氢(H2O2)3%:100ml(30%H2O2)+900ml水
3.5%FeCl3:35g(Fecl3)+965ml水
15%HCL:202ml(37%HCL)加水至500ml
九.层析液:石油醚+丙酮+苯20:2:1=1000:100:50
生物试剂篇二:生物试剂配制标准操作流程
生物试剂配制标准化操作流程
1.目的
确保试剂配制准确、有效。
2.范围
试剂研发部芯片组所用的生物试剂。
3.器材与试剂
3.1.器材
电子天平,称量匙,称量纸,移液枪,涡旋混合器,掌上离心机,磁力搅拌器,转子,玻璃棒,1L容量瓶,50ml容量瓶,100ml容量瓶,10ml容量瓶,1L烧杯,100ml烧杯,10ml烧杯,100ml量筒,10ml量筒,0.2μm孔径滤膜,1ml注射器,1.5ml离心管。3.2.试剂
EDC:1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideHydrochloride,1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亚胺,(191.7),密封、干燥、-20℃避光密闭保存。MES:2-(N-Morpholino)ethanesulfonicacid,2-(N-吗啉代)乙磺酸,(213.2),室温干燥密闭保存。
Formamide:甲酰胺,(45.041),4℃密闭保存。
10g/mlSalmonDNA:鲑鱼精DNA,室温干燥密闭保存。
SDS:dodecylsulfate,十二烷基硫酸钠,(288),室温干燥密闭保存。1mol/LNaOH:氢氧化钠,(40.01),室温密闭干燥保存。
柠檬酸三钠·2H2O:Trisodiumcitrate,dihydrate,(294.1),室温干燥密闭保存。NaCl:氯化钠,(58.44),室温干燥密闭保存。1mol/LHCl:盐酸,(36.5),室温密闭保存。
4.程序
(20mM,2×)配制:
4.1.1.配制0.1MMES母液
.在干燥环境中用电子天平称取1.21524gMES于干净的100ml烧杯中。.量取30ml蒸馏水溶解MES固体,加入数滴1mol/LNaOH调节pH至5.1。.把溶液转移到已经检查过的50ml容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加蒸馏水定容至50ml。
4.1.2.配制20mMMES
.于无菌操作台内稀释0.1MMES母液至20mM(2ml0.1M母液+8ml无菌水,即2×),分装至1.5ml离心管,全程无菌过滤,-20℃保存。
洗液配制:
×SSC(1L)洗液配制:
.在干燥环境中用电子天平称取175.3g(3M)NaCl和88.2g(0.3M)柠檬酸三钠·2H2O于1L的烧杯中。
.量取800ml去离子水溶解NaCl与柠檬酸三钠·2H2O,加入数滴1mol/LNaOH溶液调pH值至7.0。
.把溶液转移到已经检查过的1L容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至1L,分装后高压灭菌,室温密闭存放。%SDS(100ml)配制:
.在干燥环境中用电子天平称取10gSDS。.量取80ml去离子水加热溶解10gSDS。
.待溶液冷却至室温,加入数滴1mol/LHCl调pH至7.2。
.把溶液转移到已经检查过的100ml容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至100ml,室温密闭存放。×SSC(1L)洗液配制:
.加入800ml去离子水加热溶解。
.待溶液冷却至室温,加入数滴1mol/LHCl调pH至7.0-7.2。
.把溶液转移到经检查过的1L容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至1L,室温密闭存放。
×SSC(1L)洗液配制:
.量取10ml20×SSC与10ml10%SDS于1L的烧杯中。.加入800ml去离子水加热溶解。
.待溶液冷却至室温,加入数滴1mol/LHCl调pH至7.0-7.2。
.把溶液转移到经检查过的1L容量瓶中,用少量蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2-3次,洗涤液也转移到容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加水定容至1L,室温密闭存放。
(10×)配制:
4.3.1.在干燥环境中用电子天平精密称取适量的EDC粉末于离心管中。4.3.2.按EDC(mg):灭菌水(ml)=1:5的`比例向装有EDC粉末的离心管中精确加入灭菌水。
4.3.3.将装有EDC粉末和灭菌水的离心管竖直放置在涡旋混合器上混合均匀,然后于离心机上离心,室温放置(现用现配)。
(2×)配制:
4.4.1.方法一:
.用适当规格的移液枪按以下体系依次准确移取试剂于离心管中。
20×SSC10%SDSFormamide
10mg/mlSalmonDNA灭菌水
2.5ml200μl5ml100ul2.2ml
.将装有样品的离心管竖直放置在涡旋混合器上混合均匀,然后于离心机上离心。
.于无菌操作台分装HB至1.5ml离心管中,-20℃保存备用。4.4.2.方法二:
.在干燥环境下用电子天平精确称取0.8765gNaCl和0.441g柠檬酸三钠·2H2O于10ml烧杯中,加入不超过5ml(约3ml)灭菌水,用玻璃棒搅拌,待溶解后调节PH至7.0。
.在干燥环境下用电子天平精确称取0.02gSDS和0.001g鲑鱼精DNA于烧杯中。
.用1000ul移液枪准确移取5mlFormimade于烧杯中,玻璃棒搅拌均匀。.将烧杯中的液体转移至10ml容量瓶,用少量灭菌水洗涤烧杯和玻璃棒2~3次,洗涤液也转移至容量瓶中,轻轻摇动,用玻璃棒引流,加灭菌水定容至10ml。
.于无菌操作台分装HB至1.5ml离心管中,-20℃保存备用。
4.5.模板点样液配制
4.5.1.按以下体系移取试剂于离心管中。
EDCMESDNA(100μM)H2OTotal
1μl5μl1μl3μl10μl
DNA终浓度10μM。
4.5.2.将装有样品的离心管竖直放置在涡旋混合器上混合均匀,然后于离心机上离心,室温放置待用。
生物试剂篇三:常用生物试剂配制方法
常用生物试剂配制方法(buffer)
实验室各种缓冲液的配方
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液终浓度配制1L溶液
成分各成分的用量
2mol/LTris碱242g
1mol/L冰乙酸57.1ml
EDTA(pH=8.0)18.622g(200ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0))水补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445mmol/LTris碱54g
445mmol/L硼酸盐27.5g硼酸
10mmol/LEDTA20ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)水补足1L
染料
1%溴酚蓝(bromophenolblue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidiumbromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gelloadingsolutions)
6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.3N氢氧化钠300ul10N氢氧化钠6mmol/LEDTA120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
18%聚蔗糖(400型)1.8g
0.15%溴甲酚绿15mg
0.25%二甲苯青FF25mg
水补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝1.5ml1%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF1.5ml1%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
15%聚蔗糖(400型)1.5g
水补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝2.5ml1%溴酚蓝
0.25%二甲苯青FF2.5ml1%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(400型)1.5g
水补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝1.5ml1%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF1.5ml1%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
50%甘油3ml
水3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝1.5ml1%溴酚蓝
0.15%二甲苯青FF1.5ml1%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
40%聚蔗糖4g
水补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝20mg
0.2%二甲苯青FF20mg
200mmol/LEDTA4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)
0.1%SDS100ul10%SDS
50%甘油5ml
水补足到10ml
0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(调节pH=8.0),并溶于水中,定容至1L。
0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2"6H2O于足量的水中,定容到100ml。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于
1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺(可选):50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA(组分V)(可选):0.5ml10mg/mL贮液,水:2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水
加100ulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
TE(用于悬浮和贮存DNA)
成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/LTris-HCl1ml1mol/LTris-HCl(pH7.4(转载于:mol/LEDTA200ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
水98.8ml
Tris缓冲液(Tris-HClbuffer)
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积(ml)pH
8.69.0
148.8
218.6
28.58.4
388.2
468.0
567.8
667.6
71.37.4
767.2